用于极限糊精酶基因克隆的引物、试剂盒及克隆方法

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专利状态

用于极限糊精酶基因克隆的引物、试剂盒及克隆方法

有效

专利申请进度

申请

2018-10-16

申请公布

2019-01-18

授权

2020-09-11

预估到期

2038-10-16

专利基础信息

申请号	CN201811203952.8	申请日	2018-10-16
申请公布号	CN109234273A	申请公布日	2019-01-18
授权公布号	CN109234273B	授权公告日	2020-09-11
分类号	C12N15/11;C12N15/10
分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
申请人名称	青岛啤酒股份有限公司
申请人地址	山东省青岛市市北区登州路56号

专利法律状态

2020-09-11

授权

状态信息

授权
2019-02-19

实质审查的生效

状态信息

实质审查的生效；IPC(主分类):C12N15/11；申请日:20181016
2019-01-18

公布

状态信息

公布

摘要

本发明提出一种用于极限糊精酶基因克隆的引物、试剂盒及克隆方法，属于基因克隆技术领域，能够解决目前麦芽RNA提取较为困难，步骤繁琐复杂，而导致RNA纯度与质量不高，无法得到全长极限糊精酶基因的问题。该技术方案包括根据极限糊精酶基因序列设计五段基因序列，针对其中四段基因序列LD‑2、LD‑3、LD‑4、LD‑5设计上下游特异性引物，利用上下游引物克隆极限糊精酶基因，包括：极限糊精酶基因片段合成、重叠延伸PCR、全长基因的获得。本发明原理简单，操作简便，有效解决了大麦长片段目的基因难以扩增的难题；且该方法对麦芽RNA的纯度和产量要求较低；极限糊精酶的基因克隆及其N端序列优化为异源表达以及酶学性质研究奠定基础。

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