本发明公开了一种用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法。所述组合物由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成,所述多肽I的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示,多肽II的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示,多肽III的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示,对照品检测基质为鱼皮胶。通过多肽I的检测值减去多肽II的检测值,并利用多肽III的检测值来修正检测偏差,从而实现对龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的检测。该方法具有含量检测准确、操作简单的优点,在龟甲胶、鹿角胶、阿胶的真伪鉴别方面具有广泛的应用前景。