重组4Aβ15在毕赤氏酵母中的高效分泌表达及纯化方法

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专利状态

重组4Aβ15在毕赤氏酵母中的高效分泌表达及纯化方法

有效

专利申请进度

申请

2010-04-11

申请公布

2010-10-20

授权

1970-01-01

预估到期

2030-04-11

专利基础信息

申请号	CN201010163165.2	申请日	2010-04-11
申请公布号	CN101864424A	申请公布日	2010-10-20
授权公布号	CN101864424B	授权公告日	1970-01-01
分类号	C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;C07K14/47;C07K1/18;C12P21/02;C12R1/84N
分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
申请人名称	丽珠医药集团股份有限公司
申请人地址	广东省广州市中山二路74号医学科技楼中1001室

专利法律状态

2012-06-06

发明专利权授予

状态信息

授权
2011-12-28

专利申请权、专利权的转移

状态信息

专利申请权的转移；IPC(主分类):C12N 15/12；变更事项:申请人；变更前权利人:中山大学；变更后权利人:姚志彬；变更事项:地址；变更前权利人:510275 广东省广州市新港西路135号；变更后权利人:510275 广东省广州市中山二路74号医学科技楼中1001室；登记生效日:20111122
2011-12-28

专利申请权、专利权的转移

状态信息

专利申请权的转移；IPC(主分类):C12N 15/12；变更事项:申请人；变更前权利人:姚志彬；变更后权利人:丽珠医药集团股份有限公司；变更事项:地址；变更前权利人:510275 广东省广州市中山二路74号医学科技楼中1001室；变更后权利人:519070 广东省珠海市香洲区拱北桂花北路132号；登记生效日:20111122
2010-12-01

实质审查的生效

状态信息

实质审查的生效；IPC(主分类):C12N 15/12；申请日:20100411
2010-10-20

发明专利申请公布

状态信息

公布

摘要

本发明涉及一种重组4Aβ15在毕赤氏酵母中的高效分泌表达及纯化方法，是将4Aβ15基因插入含有α-factor信号肽的组成型酵母表达载体pGAPZαA中，经电击转化毕赤氏酵母菌株GS115，在YPD平板上进行培养后获得工程菌株G115Z20004Aβ15，经摇瓶发酵，在发酵上清中有高含量的4Aβ15的表达，发酵上清经UNOsphere阴离子交换柱的一步纯化可得到纯度大于85％的重组四价Aβ15。本发明利用以GAP为启动子的毕赤氏酵母组成型表达体系进行重组四价Aβ15的表达，并且通过在引物中引入XhoI和XbaI酶切位点以及Kex2信号肽切割位点和终止密码子TCA，保证了重组4Aβ15的天然氨端和羧端，大大提高工程菌株发酵上清中目标蛋白的含量。

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