本发明公开了一种特异性检测口蹄疫A型武汉株的单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体为1)含有重链可变区5G11‑VH和轻链可变区5G11‑VL;所述5G11‑VH的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1~128位所示;其5G11‑VL的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2的第1~115位所示;或2)含有重链可变区1C10‑VH和轻链可变区1C10‑VL。可以作为捕获抗体或者检测抗体制备成酶联免疫试剂盒,进行检测与目前口蹄疫其他毒株均不发生交叉反应。本发明的单克隆抗体及其组合物制备成酶联免疫试剂盒具有敏感性高、特异性好、且操作便捷,能够稳定地检测口蹄疫A型武汉株抗原含量及特异性区分口蹄疫A型武汉株与其他毒株。