本发明公开了一种对硝基苄基酯酶突变体及其在酶催化dl‑‑薄荷酯的手性拆分制备l‑薄荷醇中的应用。所述突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的野生型对硝基苄基酯酶在315位进行定点饱和突变获得。本发明的有益效果主要体现在:①本发明酯酶突变体无需添加助溶剂,酶催化活性维持较高水平;②在无助溶剂体系下,突变体酶催化的立体选择性较野生型显著提高。将该突变体酶通过大肠杆菌过量表达后用于催化反应,并以10~200g/L的dl‑乙酸薄荷酯为底物,进行水解拆分制备l‑薄荷醇,结果表明l‑乙酸薄荷酯底物转化率>70%,产物l‑薄荷醇的eep值>95%,表现出良好的工业应用性能。