本发明公开了一种用于检测阿胶糕中阿胶含量的组合物及其检测方法。所述组合物由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成,所述多肽I的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示,多肽II的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示,多肽III的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示,对照品检测基质为鱼皮胶。该组合物可用于检测阿胶糕中驴皮源成分含量,从而判断阿胶真伪。通过多肽I的检测值减去多肽II的检测值,并利用多肽III的检测值来修正检测偏差,从而实现对阿胶糕中驴皮源成分的含量检测。该方法具有含量检测准确、操作简单的优点,具有广泛的应用前景。