本发明公开了一种用于阿胶真伪鉴定的组合物、试剂盒及其检测方法。所述组合物由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成,所述多肽I的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示,多肽II的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示,多肽III的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示,对照品检测基质为鱼皮胶。利用该组合物检测阿胶中驴皮源成分含量,从而判断阿胶真伪。具体的,通过多肽I的检测值减去多肽II的检测值,并利用多肽III的检测值来修正检测偏差,从而实现对阿胶中驴皮源成分的含量检测,利用驴皮源性成分含量来鉴定阿胶真伪。该方法具有含量检测准确、操作简单的优点,在阿胶的真伪鉴别方面具有广泛的应用前景。