本发明提供一种猪细小病毒、猪流行性腹泻、大肠埃希氏菌三联疫苗,包含有抗原和疫苗佐剂,其中抗原是由保藏编号为CCTCC M 2016098的X33‑VP2菌株表达的猪细小病毒VP2蛋白;保藏编号为CGMCC No.8503的猪流行性腹泻病毒和大肠埃希氏菌K88、K99、987P的纤毛抗原。本发明的猪细小病毒、猪流行性腹泻和大肠埃希氏菌三联疫苗免疫原性好,免疫后抗体产生快,产生的抗体滴度高且维持时间长,保存期长,免疫剂量小,选用的佐剂易于注射,可一针防治三种疾病,在配种前进行免疫注射可使怀孕母猪所产仔猪获得较好的被动免疫,使仔猪产生坚强的免疫力,能够抵抗强毒的攻击,提高仔猪的存活率。