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专利状态
一种基于CRISPR-Cas9技术的miR-126全长基因敲除试剂盒及其应用
有效
专利申请进度
申请
2016-11-14
申请公布
2017-04-19
授权
2019-11-01
预估到期
2036-11-14
专利基础信息
申请号 CN201611002317.4 申请日 2016-11-14
申请公布号 CN106566838A 申请公布日 2017-04-19
授权公布号 CN106566838B 授权公告日 2019-11-01
分类号 C12N15/63;C12N15/113
分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程;
申请人名称 上海伯豪生物技术有限公司
申请人地址 上海市浦东新区张江高科技园区李冰路151号
专利法律状态
  • 2019-11-01
    授权
    状态信息
    授权
  • 2017-05-17
    实质审查的生效
    状态信息
    实质审查的生效IPC(主分类):C12N 15/63申请日:20161114
  • 2017-04-19
    公布
    状态信息
    公开
摘要
本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9技术的miR‑126全长基因敲除试剂盒及其应用。本发明优选miR‑126基因上下游CRISPR‑Cas9靶标序列,设计合成针对该靶标序列的sgRNA单链,并构建到载体中,通过转染293T细胞株,sgRNA与trRNA构成特异识别结构,从而引导Cas9酶特异剪切miR‑126基因两端对应序列,持续药筛得到miR‑126全长基因敲除细胞株;经对药筛细胞株测序验证,得到优选的上下游sgRNA组合,该组合的敲除效率高达90%以上,以此构建试剂盒,可对293T、肺癌细胞系A549以及血管内皮细胞HUVEC系等多种类型细胞系进行特异性的miR‑126全长基因敲除。